注射用重組人生長(zhǎng)激素—重組人生長(zhǎng)激素的測(cè)定—高效液相色譜法-分子排阻色譜法

本方法采用高分子排阻色譜法測(cè)定注射用重組人生長(zhǎng)激素中重組人生長(zhǎng)激素的含量。

本方法適用注射用于重組人生長(zhǎng)激素。

供試品制成磷酸鹽緩沖液（pH7.0)的溶液，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)214nm處檢測(cè)重組人生長(zhǎng)激素的吸收值，計(jì)算出其含量。

1. 異丙醇

2. 磷酸鹽緩沖液（pH7.0)

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

適合分子量為5000-60000球狀蛋白的色譜用親水硅膠為填充劑。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：異丙醇＋磷酸緩沖液= 3＋97

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：214nm

2.3 柱溫：室溫

2.4 流速：0.6mL/min

1. 磷酸鹽緩沖液（pH7.0)

無水磷酸氫二鈉5.18g，磷酸二氫鈉3.65g，加水950mL，用85%磷酸溶液調(diào)pH值至7.0，加水至1000mL。

2. 稱取供試品

精密量稱取本品適量。

3. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取重組人生長(zhǎng)激素單體與二聚體混合對(duì)照品適量，用磷酸鹽緩沖液制成每1mL含1.0mg的溶液。

4. 供試品溶液的制備

供試品置于索氏提取器中，加磷酸鹽緩沖液溶解并定量稀釋成每1mL含1.0mg的溶液，混勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

分別精密吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液20μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)214nm處測(cè)定重組人生長(zhǎng)激素單體與二聚體的吸收值，計(jì)算出其含量。

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p.413。