云南紅豆杉枝葉—紫杉醇和三尖杉寧堿的測定方法—HPLC-UV

本品細粉用乙酸乙酯-丙酮(1∶1)超聲提取，經(jīng)液相色譜儀分離，在227nm測定，外標法計算紫杉醇和三尖杉寧堿的含量

儀器設備  Agilentl100高效液相色譜儀；G1314A紫外檢測器。

色譜條件  色譜柱： Angilent Hypersil ODS柱 (4.6mm×250mm，5μm)；流動相：甲醇-乙腈-水( 20∶30∶50) ；柱溫：30℃；流速：1. 0 ml/min；檢測波長：227 nm；進樣量：10μl。

對照品溶液制備   分別精密稱取紫杉醇、三尖杉寧堿對照品適量，各加甲醇制成每毫升約含0.0467mg的溶液，作為對照品液。

供試品溶液的制備  云南紅豆杉枝葉自然干燥，粉碎，過60～80目篩，40℃減壓干燥至恒重。稱取藥材約2. 00g，精確稱定，置磨口具塞三角瓶中，加入乙酸乙酯：丙酮(1∶1) (30ml×2次)，25℃超聲振蕩提取40 min，濾過，上清液合并，減壓蒸干，殘渣加入蒸餾水10ml，石油醚(60～90℃)萃取( 10ml×3次)，石油醚層棄去，水液再用三氯甲烷萃取(10ml×3次)，合并各次三氯甲烷萃取液，用適量無水硫酸鈉脫水后，減壓蒸干，殘渣加適量三氯甲烷溶解，加于氧化鋁柱(中性，4g，內(nèi)徑0.8cm)上，用三氯甲烷洗去未被吸附的雜質(zhì)，再用1%的CH3OH∶CHCl3 (V /V )淋洗，最后用5% CH3OH∶CHCl3 50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，定容至1ml，甲醇液經(jīng)0. 45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。