一種從珍珠質(zhì)中提取可溶性基質(zhì)蛋白的方法
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公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1478793A
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公開(kāi)(公告)日
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2004.03.03
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN03145956.0
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申請(qǐng)日期
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2003.07.18
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專利名稱
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一種從珍珠質(zhì)中提取可溶性基質(zhì)蛋白的方法
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主分類號(hào)
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C07K14/435
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分類號(hào)
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C07K14/435;C07K1/14
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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清華大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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張榮慶;張岑;李碩;謝莉萍
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地址
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100084北京市北京100084-82信箱
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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代理人
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國(guó)省代碼
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北京;11
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主權(quán)項(xiàng)
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一種從珍珠質(zhì)中提取可溶性基質(zhì)蛋白的方法，其特征是由下列步驟組成：1)將粉碎后的珍珠質(zhì)中加入磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液中，于4℃攪拌72小時(shí)，離心，收集上清；2)上清液經(jīng)超濾、透析除鹽濃縮后，干燥得珍珠質(zhì)可溶性基質(zhì)；3)將可溶性基質(zhì)進(jìn)行柱層析，收集280nm下有吸收峰的小分子組分；4)將以上組分進(jìn)行高效液相色譜分離，收集280nm下有吸收峰的蛋白組分，干燥得成品；在上述過(guò)程中，所述將珍珠層粉在4℃條件下攪拌時(shí)所用的是珍珠層粉質(zhì)量2～5倍，pH為7.0，濃度1～2mM的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液；所述采用超濾、透析等方式除鹽時(shí)，超率拄和透析袋的截留分子量小于3KD；干燥采用冷凍干燥的方式；所述柱層析中的填料為Sephadex G-75葡聚糖凝膠，流動(dòng)相為pH為7.0，濃度1～2mM的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液，收集的為280nm下有吸收的分子量較小的，相對(duì)較晚洗脫下來(lái)的組分；所述高效液相色譜中的填料為C18顆粒，流動(dòng)相為濃度在0-100％之間梯度遞增的乙腈水溶液，收集的為280nm下有吸收的三個(gè)主要蛋白峰中的第三個(gè)峰所對(duì)應(yīng)時(shí)間洗脫下來(lái)的蛋白組分。
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摘要
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一種從珍珠質(zhì)中提取可溶性基質(zhì)蛋白的方法，屬醫(yī)學(xué)組織工程領(lǐng)域。本發(fā)明方法包括下述步驟：1)將珍珠層粉中加入磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液中，于4℃攪拌72小時(shí)，離心，收集上清；2)上清液經(jīng)超濾、透析除鹽濃縮后，干燥得珍珠質(zhì)可溶性基質(zhì)；3)將可溶性基質(zhì)進(jìn)行柱層析，收集280nm下有吸收峰的小分子組分；4)將以上組分進(jìn)行高效液相色譜分離，收集280nm下有吸收峰的蛋白組分，干燥得成品。本發(fā)明分離純化的珍珠質(zhì)可溶性基質(zhì)蛋白，可以廣泛應(yīng)用于制備預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松藥物、制備醫(yī)用生物新材料、珍珠或類珍珠材料的體外培養(yǎng)及提高珍珠產(chǎn)量與質(zhì)量等領(lǐng)域。
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國(guó)際公布
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