由于幽門螺桿菌（H.pylori，Hp)人群感染率高，在正常人群中往往也存在一定的抗Hp抗體滴度，在抗體測定中因選擇的陰性參考血清不同，各檢驗單位間的資料沒有可比性，同時也不利于病人抗Hp治療后對其抗體滴度變化的觀察。本實驗在大量人群資料和實驗室資料的基礎上，確定了抗Hp尿素酶抗體檢測中的陽性判斷界值，建立了此抗體檢測標準系統(tǒng)，完成了標準陽性血清中特異性抗Hp尿素酶抗體的定量工作。
1 材料和方法
1.1 材料
抗Hp抗體陽性及陰性血清各50份，經實驗室酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA)和免疫印跡分析（Western blots)證實。10736份其它血清采自北京和河南的四個人群現(xiàn)場。Hp尿素酶抗原（HpU)由本實驗室分離純化。酶標板采用美國Linbro/Titertek酶標板。IgG標準品購自百泰生物技術公司，為日本北里研究所產品，IgG含量為15.5g/L。參考血清由多份抗Hp抗體陽笥血清混合而成。
1.2 方法
�、儆�6μgHpU/孔包被酶標板。用常規(guī)ELISA方法測定各血血中的抗Hp抗體，用Linbro/Titertek酶標儀讀取各孔吸光度（A)[舊稱光密度（OD)下同]，用參考血清作板間校正后，用Foxpo及EPI軟件對結果進行分析處理，確定血清抗Hp菌IgG抗體檢測結果與臨床Hp感染的高符后率判斷界值。②用100～0.001μgIgG標準品/孔不同濃度包被酶標板（每種濃度包被3孔)，用ILISA方法測定IgG標準品的結合量，觀察IgG標準品可全部結合時的適宜包被濃度用IgG標準品被量與吸光度（A)間存在線性關系的范圍。③用過量抗原（300μgHpU/孔)包被酶標板，將能考血清按1：20～1280倍比稀釋后，用常規(guī)ELISA方法測定各稀釋血清中的抗HpU抗體（每滴度測定6孔)，用Linbro/Titertek酶標儀讀取各孔吸光度（A)，繪制不同滴度與吸光度（A)間存在線性關系的范圍內，采用三點計算參考血清中抗HpU特異性抗體的含量，并按其均值推算標準陽性血清中特異性抗HpU抗體的含量。
2 結果
統(tǒng)計結果顯示，用參考血清及吸光度（A)的0.77倍[即將參考血清稀釋3.74倍時的吸光度（A)]作為判斷待測血清的陽性標準時，達到最高的檢測符合率，此時對100份抗幽門螺桿菌抗體陽性及陰性血清的檢測符合率為100％。
IgG標準品可全部結合時的適宜包被濃度為≤0.2μgIgG標準品/孔，IgG標準品包被量與吸光度（A)間存在線性關系的范圍為包被濃度為0.2～0.01μgIgG標準品/孔。
在IgG標準品包被量與吸光度（A)間存在線性關徑流的范圍內，采用三點進行參考血清HpU特異性抗體的含量測定結果分別為239、248和248μg /ml，平均245μg/ml。依此計算得出標準陽性血清中特異性抗HpU抗體的含量為66μg/ml。
3 討論
本實驗在大量人群資料和實驗資料的基礎上，建立了抗體幽門螺桿菌血清抗體診斷標準，并在國內抗幽門螺桿菌素酶抗體檢測中首次采用判斷界值技術，完成了標準陽性血清中特異性抗幽門螺桿菌尿素酶抗體的定量工作，不但使檢驗過程更加穩(wěn)定，使各檢驗單位的資料具有可比性，也使基層單位應用目測判斷結果也能達到檢驗要求。此標準系統(tǒng)用于慢性胃炎和消化性潰瘍的協(xié)助診斷及流行病學調查，在北京天壇醫(yī)院、友誼醫(yī)院、北京腫瘤研究所、首都兒科研究所及廣東、江西、河北、內蒙、河南等地的應用取得了良好的效果。
張建中 陳晶晶 蔣秀高
中國預防醫(yī)學科學院流行病學微生物學研究所（北京102206)
國家自然科不基金和工業(yè)部青年基金資助項目
