一、特異性目的核酸（或基因)的制備
核酸分子探針的制備首先需要獲得所要的特異性核酸或其片段�？捎靡韵路椒ㄖ苽洌�
�。�1)直接分離基因核酸：即從基因組上直接用內(nèi)切酶切下所需基因。
�。�2)化學(xué)合成基因核酸：即以單核苷酸為原料，以固相磷酸三酯法合成某一結(jié)構(gòu)完全清楚，分子量較小的寡核苷核。
�。�3)酶促合成核酸：在真核細胞中獲得特異的結(jié)構(gòu)基因。常用方法是以mRNA為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成單鏈cDNA，再以大腸桿菌DNA聚合酶I合成雙鏈的結(jié)構(gòu)基因。
（4)RNA探針。
二、目的核酸的擴增
在獲得特異的目的基因后，可用以下方法大量擴增制備：①用體外DNA重組技術(shù)與載體DNA相連，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中進行無性繁殖。以氯化銫超速離心純化重組質(zhì)粒DNA，并以合適限制性內(nèi)切酶消化，經(jīng)凝膠電泳制備回收特異的目的核酸片段。②聚合酶鏈式反應(yīng)（Poly－merase chain reaction, PCR)擴增技術(shù)：利用這種先進技術(shù)能簡便快速制備大量特異性目的核酸片段。PCR技術(shù)的基本原理是利用DNA聚合酶依賴于DNA模板的特征，在體外用一對和欲擴增DNA片段的兩側(cè)序列互補的引物誘發(fā)聚合反應(yīng)，即雙鏈DNA先高溫變性，然后在低溫下與引物退火，再在中等溫度進行鏈延伸反應(yīng)。上述在三種不同溫度下的變性、退火和延伸為一個循環(huán)反應(yīng)，重復(fù)這種循環(huán)反應(yīng)可使DNA獲得指數(shù)性倍增，例如經(jīng)過35個循環(huán)反應(yīng)，DNA可擴增1×108倍以上。
