藥物分析-授課教案:第八章　雜環(huán)類藥物分析

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

重點(diǎn)介紹五類雜環(huán)藥物：即吡啶類中的尼可剎米、異煙肼和硝平地平等；喹啉類中的硫酸奎寧和奎尼丁、鹽酸環(huán)丙沙星等；托烷類中的硫酸阿托品和氫溴酸東莨菪堿等；吩噻嗪類中的氯丙嗪、異丙嗪、奮乃靜和鹽酸硫利達(dá)嗪等；苯駢二氮雜卓類中的地西泮、奧沙西泮和氯氮卓等�！　　　　　　　�

第一節(jié)　吡啶類藥物的分析

一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

(一) 典型藥物的結(jié)構(gòu)

 (二) 主要化學(xué)性質(zhì)

1.弱堿性　母核吡啶環(huán)上有堿性氮原子，顯弱堿性。尼可剎米遇堿水解后，釋放出具有堿性的二乙胺，可以此進(jìn)行鑒別。

2.吡啶環(huán)的特性　含有吡啶環(huán)，可發(fā)生開環(huán)反應(yīng)（特性反應(yīng))。

3.還原性 異煙肼吡啶環(huán)γ位上被酰肼取代，酰肼基具有較強(qiáng)的還原性，并可與某些含羰基的試劑發(fā)生縮合反應(yīng)。

二、鑒別試驗(yàn)

(一) 吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)

1.戊烯二醛反應(yīng)（Konig反應(yīng))　當(dāng)溴化氰與芳香第一胺作用于吡啶環(huán)， 可形成戊烯二醛的有色西fo氏堿類（聚甲炔染料)。這一反應(yīng)不能由吡啶環(huán)單獨(dú)發(fā)生，而是在溴化氰加到吡啶環(huán)，使環(huán)上氮原子由3價(jià)轉(zhuǎn)變成5價(jià)時(shí)，吡啶環(huán)水解，形成戊烯二醛后再與芳香第一胺縮合而成。

　　本反應(yīng)適用于吡啶環(huán)α、α’位未取代，以及β或γ位為烷基或羧基的衍生物。異煙肼和尼可剎米均具有此反應(yīng)，而中國藥典只用于尼可剎米的鑒別，所用芳香第一胺為苯胺。

　　方法 取本品1滴，加水50ml，搖勻，分取2ml，加溴化氰試液2ml與2. 5 ％苯胺溶液3ml，搖勻，溶液漸顯黃色。

用于異煙肼鑒別時(shí)，應(yīng)先用高錳酸鉀或溴水氧化為異煙酸，再與溴化氰作用，然后再與芳香第一胺縮合形成有色的戊烯二醛衍生物。戊烯二醛衍生物的顏色隨所用芳香第一胺不同而有所不同，如與苯胺縮合形成黃至黃棕色；與聯(lián)苯胺則形成淡紅至紅色。

講授結(jié)合多媒體教學(xué)

復(fù)習(xí)舊課（3min)

作業(yè)解析(5min)

引入新課(2min)

2min，

異煙肼：4-吡啶甲酰肼

尼可剎米：N,N-二乙基-3-吡啶甲酰胺

硝平地平：2，6-二甲基 -4-（2-硝基苯基)-1，4-二氫-3，5-吡啶二甲酸二甲酯

6min

利用還原性，Ch.P(2005):溴酸鉀法測定異煙肼的含量。

7min

通過多媒體課件，結(jié)合各步化學(xué)反應(yīng)式進(jìn)行講解。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

　　尼可剎米、異煙肼和異煙腙等，需經(jīng)適當(dāng)處理，即將酰肼氧化成羧基或?qū)Ⅴ０匪�解為羧基后才有此反�?yīng)。中國藥典已用于異煙腙的鑒別。

　　用于異煙肼鑒別時(shí)，可取其乙醇溶液加入硼砂及5％2, 4-二硝基氯苯乙醇溶液，蒸干，繼續(xù)加熱10min，殘?jiān)�加甲醇攪拌后，即顯紫紅色。

若異煙肼不經(jīng)處理，則其酰肼基在乙醇溶液中，亦可與2, 4-二硝基氯苯反應(yīng)，生成2,4-二硝基苯肼衍生物，在堿性溶液中呈紫紅色。

(二) 形成沉淀的反應(yīng)

本類藥物具有吡啶環(huán)的結(jié)構(gòu)，可與重金屬鹽類（如氯化汞、硫酸銅)及苦味酸等試劑形成沉淀。如尼可剎米可與硫酸銅及硫氰酸銨作用生成草綠色配位化合物沉淀。

異煙肼、尼可剎米可與氯化汞形成白色沉淀。

(三)　酰肼基團(tuán)的反應(yīng)

1.還原反應(yīng)　

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

異煙肼與亞硒酸作用，可將其還原成紅色硒的沉淀。

中國藥典使用氨制硝酸銀試液。

  異煙肼  ChP（2005)

 【鑒別】 （2)取異煙肼約10 mg，置試管中，加水2 ml溶解后，加氨制硝酸銀試液1 m1，即發(fā)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。

2.縮合反應(yīng)　酰肼基與芳醛縮合形成腙，析出結(jié)晶，可測定其熔點(diǎn)。最常用的芳醛為香草醛，其次是對二甲氨基苯甲醛、水楊醛等與1,2－萘醌－4－磺酸在堿性介質(zhì)中可縮合顯紅色，凡具有－NH₂或活性－CH₂－基者均有此反應(yīng)。

異煙肼  ChP（2005)

 【鑒別】 （1)取本品約0.1 g，加水5 ml溶解后，加10％香草醛的乙醇溶液1 m1，搖勻，微熱，放冷，即析出黃色結(jié)晶，濾過，用稀乙醇重結(jié)晶，在105℃干燥后，測定熔點(diǎn)，其熔點(diǎn)為228～231℃，熔融時(shí)同時(shí)分解。

(四) 分解產(chǎn)物的反應(yīng)

(五) 紫外吸收光譜特征

三、有關(guān)物質(zhì)的檢查

(一) 異煙肼中游離肼的檢查

異煙肼是一種不穩(wěn)定的藥物，其中的游離肼是由制備時(shí)原料引入，或在貯存過程中降解而產(chǎn)生。而肼又是一種誘變劑和致癌物質(zhì)，因此國內(nèi)外藥典多數(shù)規(guī)定了異煙肼原料藥及其制劑中游離肼的限量檢查。常用的方法有薄層色譜法，比濁法和差示分光光度法。 

BP(1998)亦采用本法檢查“游離肼及有關(guān)物質(zhì)”。

2.比濁法

注意：

中國藥典使用氨制硝酸銀試液，注意其現(xiàn)象。

UV利用最大、最小吸收及百分吸收系數(shù)鑒別

10min

比濁法自學(xué)

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

3.差示分光光度法  利用游離肼與對-二甲氨基苯甲醛可形成黃色縮合產(chǎn)物(對-二甲氨基苯甲醛連氮)，于456nm波長處有最大吸收；而異煙肼與上述試劑形成的縮合產(chǎn)物(對-二甲氨基芐叉)在此波長處無吸收;根據(jù)這一性質(zhì)，同時(shí)運(yùn)用差示分光光度法,在參比溶液中加3%(V/V)的丙酮，可與肼生成無色的二甲基甲酮連氮，在456nm波長處無吸收; 而異煙肼(干擾組分)生成的縮合物在456nm波長處的吸收度與供試溶液(不含丙酮)的吸收度相等，即△A456nm為零，對游離肼測定無干擾。進(jìn)而，可在456nm波長處測定并計(jì)算二者的差示吸收度△A456nm，同時(shí)以對照品比較法計(jì)算游離肼含量。

參比溶液中丙酮含量在3%時(shí)，異煙肼(干擾組分)生成的縮合物在456nm波長處的吸收度與供試溶液(不含丙酮)的吸收度相等，即△A456nm為零，對游離肼測定無干擾。若添加的丙酮量高于或低于3%時(shí)，均不能使異煙肼的△A456nm為零(圖8-2)。

測定方法如下：

對照品溶液的制備與測定

供試品溶液的制備與測定

(二) 尼可剎米中有關(guān)物質(zhì)檢查--TLC高低濃度對照法

(三)硝苯地平中有關(guān)物質(zhì)的檢查

15in,其中首先講解原理(5min)，再引入游離肼的差示分光光度法(10min)檢查。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

課間休息十分鐘

第二節(jié)  喹啉類藥物

一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)

(一)典型藥物的結(jié)構(gòu)

復(fù)習(xí)上節(jié)課內(nèi)容

3min

結(jié)構(gòu)講解2min，典型藥物講解5min。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

1、堿性  氮原子有堿性，與強(qiáng)酸成穩(wěn)定的鹽。

     喹核堿：含脂環(huán)氮，堿性強(qiáng)，與硫酸成鹽

     喹啉環(huán)：芳環(huán)氮，堿性弱，不能與硫酸成鹽

2、旋光性  硫酸奎寧為左旋體，=-2370～-2440；

    硫酸奎尼丁為右旋體，=+2750～+2900

鹽酸環(huán)丙沙星無旋光性

3、熒光特性  硫酸奎寧和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均顯藍(lán)色熒光

  鹽酸環(huán)丙沙星無熒光

二、鑒別試驗(yàn)

(一)綠奎寧反應(yīng)(Thalleioquin)

奎寧和奎尼丁為6位含氧喹啉衍生物，可以發(fā)生綠奎寧反應(yīng)。

以6-羥基喹啉為例：經(jīng)氯水的氯化反應(yīng)，再以氨水處理，生成綠色的二醌基吲胺的銨鹽，即為綠奎寧反應(yīng)的基本機(jī)制。

如Ch.P(2005):

硫酸奎寧：

^{【鑒別】  (1) 取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光。}

^{(2) 取鑒別(1)項(xiàng)剩余的溶液5ml，加溴試液3滴與氨試液1ml ，即顯翠綠色。} 

^{硫酸奎尼�。�}

^{【鑒別】  (1) 取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光，加幾滴鹽酸，熒光即消失。} 

^{(2) 取上述溶液5ml ，加溴試液1 ～2 滴后，加氨試液1ml ，即顯翠綠色。}

結(jié)合化學(xué)結(jié)構(gòu)，在旋光性上注意觀察其立體結(jié)構(gòu)。

10min

10min

中國藥典采用此反應(yīng)鑒別奎寧和奎尼丁。給學(xué)生講解中國藥典的鑒別方法，加深理解。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

1、紫外吸收光譜特征  Ch.P(2005)用本法鑒別鹽酸環(huán)丙沙星。

^{【鑒別】  (2)取本品，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含8μg的溶液，照分光光度法(附錄Ⅳ A)測定，在277nm與315nm的波長處有最大吸收。}

^{2、熒光光譜特征}

^{硫酸奎寧   稀硫酸溶液}

   ^{藍(lán)色熒光}

^{硫酸奎尼丁} 

鹽酸環(huán)丙沙星 無熒光

3、紅外吸收光譜特征

   硫酸奎寧和鹽酸環(huán)丙沙星采用IR鑒別。

   硫酸奎尼丁  未用此法

4、無機(jī)酸鹽

   利用鑒別。

如：硫酸奎尼丁的鑒別

^{【鑒別】(3) 本品的水溶液顯硫酸鹽的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ)。}

^{三、特殊雜質(zhì)檢查} 

^{(一)硫酸奎寧中特殊雜質(zhì)檢查}

^{來源：中間體、副反應(yīng)產(chǎn)物}

^檢查：

^{酸度----控制酸性雜質(zhì)。}

^{三氯甲烷-乙醇中不溶物----控制醇中不溶性雜質(zhì)或無機(jī)鹽類。}

^{其他金雞納堿----采用高低濃度對比法控制其他生物堿。}

^{Ch.P(2005)中檢查項(xiàng)內(nèi)容}

^{(二)鹽酸環(huán)丙沙星中特殊雜質(zhì)檢查}

^{來源：生產(chǎn)、貯藏過程中引入。}

^檢查：

^{酸度----控制酸性雜質(zhì)。}

^{溶液的澄清度與顏色----控制水中不溶性物質(zhì)和有色雜質(zhì)。}

^{有關(guān)物質(zhì)----采用HPLC法中歸一化法控制引入的結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)雜質(zhì)。}

^{Ch.P(2005)中檢查項(xiàng)內(nèi)容}

5min

5min

問題討論(5min)；

作業(yè)和習(xí)題布置(2min)；

歸納總結(jié)(3min)

小 結(jié)

通過學(xué)習(xí)使學(xué)生掌握差示分光光度法的原理及應(yīng)用，熟悉吡啶類藥物的鑒別：吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)，酰肼基團(tuán)的反應(yīng)； 喹啉類藥物的鑒別試驗(yàn)，特殊雜質(zhì)檢查方法：  綠奎寧反應(yīng)

復(fù)習(xí)思考題

或

作 業(yè) 題

1、中國藥典采用何種方法檢查異煙肼中游離肼的檢查？如何檢查異煙肼中的游離肼？

2、差示分光光度法的原理？

3、硫酸奎寧、硫酸奎尼丁和鹽酸環(huán)丙沙星的主要化學(xué)性質(zhì)？

教 學(xué) 效 果

與 分 析

多媒體教學(xué)和板書相結(jié)合，并結(jié)合一定的實(shí)例，加深學(xué)生對知識點(diǎn)的認(rèn)識和了解。特別是通過問題討論，讓大家對所學(xué)知識進(jìn)行回顧、討論，建立一個(gè)互動的教學(xué)氛圍。效果較好。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

第三節(jié)  托烷類藥物

本類藥物是由莨菪烷衍生的氨基醇與不同的有機(jī)酸縮合酯的生物堿，即雙環(huán)-1(R)、5(S)-托品烷系和有機(jī)酸，二者多在3-位結(jié)合成酯。常見的有顛茄生物堿和古柯生物堿。

母核

N-甲基-8-氮雜雙環(huán)[3,2,1]-3-辛醇

 (一)典型藥物的結(jié)構(gòu)

(二)主要化學(xué)性質(zhì)

1、水解性  具酯結(jié)構(gòu)，易水解。

  如：阿托品可水解成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)。

講授結(jié)合多媒體教學(xué)

復(fù)習(xí)舊課（3min)

作業(yè)解析(5min)

引入新課(2min)

注意立體結(jié)構(gòu)及其所含結(jié)晶水。即硫酸阿托品為一水合物，如在含量測定中要換算成一水硫酸阿托品的量(694.85/676.83)

5min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

3、旋光性

氫溴酸東莨菪堿   含不對稱碳原子，左旋體，比旋度-24^o～-27^o。

阿托品  含不對稱碳原子，消旋體，無旋光性。

二、鑒別試驗(yàn)

(一)托烷生物堿一般鑒別試驗(yàn)

Ch.P(2005) 附錄Ⅲ

鑒別方法：取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘?jiān)�，放冷，加乙�?～3滴濕潤，加固體氫氧化鈉一小粒，即顯深紫色。

(二)氧化反應(yīng)

水解產(chǎn)物莨菪酸，與硫酸和重鉻酸鉀在加熱的條件下，發(fā)生氧化反應(yīng)，生成苯甲醛(俗稱苦杏仁油)。

 (三)沉淀反應(yīng)

可與生物堿沉淀劑生成沉淀

阿托品+氯化汞醇   黃色沉淀

東莨菪堿+氯化汞醇   白色復(fù)鹽沉淀

10min

首先水解成莨菪酸，再硝酸處理。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

硫酸阿托品：

+ 白色沉淀不溶解

   +白色沉淀溶解

氫溴酸東莨菪堿：

   +

   +

三、氫溴酸東莨菪堿中特殊雜質(zhì)的檢查

制法概要：

雜質(zhì)來源：生產(chǎn)和貯藏

檢查：

酸度----強(qiáng)酸弱堿鹽，5%水溶液，pH=4.0～5.5。

其他生物堿----①加氨試液，不得發(fā)生渾濁。否則，有阿撲阿托品、顛茄堿等其他生物堿。

②加氫氧化鉀試液，發(fā)生瞬即消失的類白色渾濁。(因加氫氧化鉀試液后，有東莨菪堿析出顯渾濁。但東莨菪堿在堿性條件下水解，生成異東莨菪堿醇和莨菪酸，前者在水中易溶；后者生成堿式鹽在水中也能溶解，故可使瞬即發(fā)生的渾濁消失。)

易氧化物----檢查阿撲阿托品及其他含有不飽和雙鍵的有機(jī)物質(zhì)等雜質(zhì)�？墒垢咤i酸鉀溶液褪色。

5min

雜質(zhì)來源：生產(chǎn)和貯藏

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)

(一)　結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與典型藥物

吩噻嗪類藥物分子結(jié)構(gòu)中具有共同的硫氮雜蒽母核，基本結(jié)構(gòu)如下：

  結(jié)構(gòu)差異：母核2位上的R'取代基，通常為－H、－Cl、－CF₃、－COCH₃、－SCH₂CH₃等；10位上的R取代基，則為具有2-3個(gè)碳鏈的二甲或二乙胺基，或?yàn)楹�氮雜環(huán)如哌嗪和哌啶的衍生物等。

臨床上使用多為其鹽酸鹽，常用的吩噻嗪類典型藥物的結(jié)構(gòu)：

5min，強(qiáng)調(diào)取代基。

典型藥物的結(jié)構(gòu)。

5min。

鹽酸氯丙嗪：

N,N-二甲基 -2-氯-10H- 吩噻嗪-10-丙胺鹽酸鹽。

鹽酸異丙嗪：N,N,α－三甲基-10H- 吩噻嗪-10-乙胺鹽酸鹽

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

(二) 主要化學(xué)性質(zhì)

1.具有紫外和紅外吸收光譜特征  本類藥物的紫外特征吸收，主要由母核三環(huán)的π系統(tǒng)所產(chǎn)生。一般具有三個(gè)峰值，即在204nm～209nm（205nm附近)、250nm～265nm（254nm附近)、和300nm～325nm（300nm附近)。 最強(qiáng)峰多在250nm～265nm（ε為2.5×10⁴～3×10⁴)；兩個(gè)最小吸收峰則在220nm及280nm附近。

2.  10位上的取代基（R')不同，會引起吸收峰發(fā)生位移  例如2位上鹵素的取代（－Cl及－CF₃)可使吸收峰向紅移2nm～4nm，同時(shí)會使250nm～265nm區(qū)段的峰強(qiáng)度增大。R' 引起吸收峰位移，可能是通過對位效應(yīng)影響三環(huán)π系統(tǒng)的S，而間位效應(yīng)又影響三環(huán)π系統(tǒng)的N所發(fā)生的。因此，利用其紫外特征吸收可進(jìn)行本類藥物的鑒別。

本類藥物母核的硫?yàn)槎�價(jià)，易氧化，其氧化產(chǎn)物為亞砜及砜，與未取代的吩噻嗪母核的吸收光譜（見圖8-3 中 1)有明顯不同，它們具有四個(gè)峰值（見圖8-3 中 2,3)。因此，可以利用紫外吸收光譜的這些特征測定藥物中雜質(zhì)氧化物存在的量；同時(shí)也可在藥物含量測定時(shí)對氧化產(chǎn)物的干擾進(jìn)行校正。

鹽酸氟奮乃靜：

4-〔3-［2-（三氟甲基)-10H- 吩噻嗪-10-基］丙基］-1- 哌嗪乙醇二鹽酸鹽

10min

注意：吩噻嗪及其氧化產(chǎn)物的紫外光譜。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

4.與金屬離子絡(luò)合呈色　母核中未被氧化的S原子，可與金屬離子（如Pd²⁺)形成有色絡(luò)合物，其氧化產(chǎn)物砜和亞砜則無此反應(yīng)。利用此性質(zhì)可進(jìn)行鑒別和含量測定，并具有專屬性，可排除氧化產(chǎn)物的干擾。   

    課間休息十分鐘

二、鑒別試驗(yàn)

(一)　紫外特征吸收和紅外吸收光譜

表  吩噻嗪類藥物的紫外特征吸收鑒別實(shí)例

國藥典（2005年版)用IR鑒別的有：奮乃靜、癸奮乃靜、鹽酸三氟拉嗪和鹽酸二氧丙嗪等藥物。

5min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

　　1.氧化劑氧化顯色　吩噻嗪類藥物可被不同氧化劑如硫酸、硝酸、過氧化氫等氧化而呈色，反應(yīng)情況列于表8-4。

2.與鈀離子絡(luò)合顯色　吩噻嗪類藥物分子結(jié)構(gòu)中的未被氧化的二價(jià)Ｓ能與金屬鈀離子絡(luò)合形成有色絡(luò)合物，如與癸氟奮乃靜形成紅色的絡(luò)合物。　　

癸氟奮乃靜  ChP（2005)

[鑒別] （2)取本品約 50mg，加甲醇2ml 溶解后，加 0.1% 氯化鈀溶液 3ml，即有沉淀生成，并顯紅色，再加過量的氯化鈀溶液，顏色變深。  

(三)分解產(chǎn)物的反應(yīng)

癸氟奮乃靜  Ch.P（2005)

3min

2min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

   除鹽酸氟奮乃靜未列此項(xiàng)檢查外，其余六種原料藥與其部分制劑均規(guī)定了該項(xiàng)檢查。

　 (一)　鹽酸異丙嗪合成工藝與雜質(zhì)的來源

　　 1.合成工藝

　　 2.雜質(zhì)的來源　異丙嗪合成過程中易產(chǎn)生以下副反應(yīng)：

10min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

(二)　檢查方法　

取本品，加二氯甲烷制成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加二氯甲烷制成每1ml中含0.15mg和0.05mg的溶液，作為對照溶液(1)和(2)。吸取上述三種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF₂₅₄薄層板上，以己烷-丙酮-二乙胺(8.5:1:0.5)為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3個(gè)；其雜質(zhì)斑點(diǎn)與對照溶液(2)的主斑點(diǎn)比較，不得更深；如有一點(diǎn)超過，應(yīng)不得深于對照溶液(1)的主斑點(diǎn)。

　　注意點(diǎn)：①異丙嗪遇光不穩(wěn)定，上述檢查應(yīng)在避光條件下操作; ②溶液應(yīng)臨用時(shí)配制，否則雜質(zhì)斑點(diǎn)增多。

第五節(jié) 苯駢二氮雜卓類藥物

一、結(jié)構(gòu)特征與典型藥物

苯駢二氮雜卓類藥物為含氮雜原子、六元和七元環(huán)并合而成的有機(jī)化合物，其中1,4-苯駢二氮雜卓類藥物是目前臨床應(yīng)用最廣泛的鎮(zhèn)靜劑。典型藥物的結(jié)構(gòu)為:

在不同pH介質(zhì)中形成不同的分子形式(H₂A⁺，HA，A^-)有關(guān), 在強(qiáng)酸性溶液中可水解。

5min

3min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

(一) 化學(xué)反應(yīng)

1. 沉淀反應(yīng)

2. 水解后呈芳伯胺反應(yīng)(重氮化-偶合反應(yīng)) 氯氮卓、艾司唑侖和奧沙西泮的鹽酸溶液(1→2)，緩緩加熱煮沸，放冷，加亞硝酸鈉和堿性β-萘酚試液，生成橙紅沉淀，而后者放置色漸變暗。

7min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

4. 分解產(chǎn)物的反應(yīng) 上述列舉的本類藥物均為有機(jī)氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，生成氯化氫，以5%氫氧化鈉溶液吸收，加硝酸酸化，顯氯化物反應(yīng)。中國藥典僅用于地西泮和三唑侖藥物的鑒別。

5. 氯化銅顏色反應(yīng)    

(二) 紫外和紅外吸收光譜

(三) 薄層色譜法

苯駢二氮雜卓類藥物發(fā)展很快，目前臨床應(yīng)用的品種不斷增多。由于本類藥物結(jié)構(gòu)相似，不易分離、鑒別，因此薄層色譜法常被用于本類藥物的系統(tǒng)鑒別。

1. 常用的五種苯駢二氮雜卓類藥物的TLC法

2. 酸水解產(chǎn)物的TLC法

三、特殊雜質(zhì)檢查

苯駢二氮雜卓類藥物由于生產(chǎn)工藝過程或貯藏期間出現(xiàn)分解，致使藥物中存在中間體、副產(chǎn)物等雜質(zhì)(有關(guān)物質(zhì))和降解產(chǎn)物。目前國內(nèi)外藥典多采用薄層色譜法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)和降解產(chǎn)物的檢查。而用高效液相色譜法，檢查本類藥物質(zhì)量的報(bào)道，也在逐年增多。

   (一)有關(guān)物質(zhì)檢查

中國藥典收載的八種本類藥物，除氯氮卓外，其余均作此項(xiàng)檢查。

方法：三唑侖用氣相色譜，其余用薄層色譜。

說明：Ch.P采用“溶液的澄清度”檢查來控制氯氮卓中中間體等水中不溶性雜質(zhì)。

USP(24)和BP(2000)對氯氮卓作此項(xiàng)檢查。

方法：薄層色譜法

5min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

來源：合成過程中的副反應(yīng)。

雜質(zhì)：N-去甲基苯甲二氯氮卓及化學(xué)結(jié)構(gòu)不明的有關(guān)物質(zhì)。

方法：TLC  高低濃度對比法

Ch.P(2005)：

^{有關(guān)物質(zhì)  取本品，加丙酮制成每1ml 中含100mg 的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加丙酮稀釋成每1ml 中含0.3mg 的溶液，作為對照溶液。照薄層色譜法（附錄Ⅴ B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μg，分別點(diǎn)于同一硅膠ＧＦ254 薄層板上，以醋酸乙酯－己烷(1:1) 為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm) 下檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。} 

2、氯氮卓中的關(guān)物質(zhì)的檢查

USP(24)：

有關(guān)物質(zhì)：中間體—氧化物

分解產(chǎn)物－氨基物

方法：TLC  對照品法  BP(2000)：

   方法：TLC  高低濃度對比法   ^{Ch.P(2005)：}

采用“溶液的澄清度”檢查來控制氯氮卓中中間體等水中不溶性雜質(zhì)。

^{【檢查】  溶液的澄清度  取本品0.50g,加鹽酸溶液(9→200)25ml，振搖使溶解，溶液應(yīng)澄清；如發(fā)生渾濁，與對照液（取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液10ml，加5 ％碳酸氫鈉溶液1ml,混勻，再加水14ml) 比較，不得更濃。}  

(二)降解產(chǎn)物的檢查

 地西泮注射液列入此項(xiàng)檢查。

 雜質(zhì)來源：貯藏過程中分解產(chǎn)物2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮

^【檢查】

^{分解產(chǎn)物  取本品，加甲醇分別制成每1ml 中含1mg 的供試品溶液和每1ml 中含5靏的對照溶液。照含量測定項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，取對照溶液10μl 注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為記錄儀滿量程的10％；再準(zhǔn)確量取上述兩種溶液各10μl 分別進(jìn)樣，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的4 倍，供試品溶液的色譜圖中主成分峰之后如顯示雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積的和，不得大于對照溶液主成分峰的峰面積。}

^{【含量測定】  照高效液相色譜法（附錄Ⅴ D)測定。}  

^{色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)  用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇－水(70:30)為流動相；檢測波長為254nm 。理論板數(shù)按地西泮峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，地西泮峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。}

問題討論(5min)；

作業(yè)和習(xí)題布置(2min)；

歸納總結(jié)(3min)

小 結(jié)

通過學(xué)習(xí)，使學(xué)生熟悉托烷類、吩噻嗪類、苯駢二氮雜卓類藥物的基本結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)，鑒別試驗(yàn)和檢查方法。

復(fù)習(xí)思考題

或

作 業(yè) 題

1、如何區(qū)別硫酸阿托品與氫溴酸東莨菪堿？

2、在氫溴酸東莨菪堿的特殊雜質(zhì)檢查中，為什么會發(fā)生瞬即消失的類白色渾濁？

3、吩噻嗪與其氧化產(chǎn)物的紫外吸收光譜有何不同？

4、托烷類、吩噻秦類、苯并二氮雜卓類藥物分別有哪些鑒別方法？

教 學(xué) 效 果

與 分 析

多媒體教學(xué)和板書相結(jié)合，并結(jié)合一定的實(shí)例，加深學(xué)生對知識點(diǎn)的認(rèn)識和了解。特別是通過問題討論，讓大家對所學(xué)知識進(jìn)行回故、討論，建立一個(gè)互動的教學(xué)氛圍。效果較好。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

一、非水溶液滴定法

(一)機(jī)理

是指在非水溶劑(有機(jī)溶劑與不含水的無機(jī)溶劑)中進(jìn)行滴定分析的方法。

以非水溶劑作為滴定介質(zhì)，不僅能增大有機(jī)化合物的溶解度，而且能改變物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)(如酸堿度及其強(qiáng)度)，使在水中不能進(jìn)行完全的滴定反應(yīng)能夠順利進(jìn)行，從而擴(kuò)大了滴定分析的應(yīng)用范圍。

由于本類藥物多為弱堿性，在水溶液中用標(biāo)準(zhǔn)酸直接滴定沒有明顯的突躍，終點(diǎn)難以觀測，常不能獲得滿意的測定結(jié)果。而在非水酸性介質(zhì)中，只要在水溶液中的K_b值大于10^-10,都能被冰醋酸均化到溶劑AC^-水平，堿強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，因而使弱堿性藥物的滴定能順利進(jìn)行。

溶劑只起到傳遞質(zhì)子的作用，其本身未起變化。

醋酸合質(zhì)子和醋酸陰離子發(fā)生以下反應(yīng)：

  當(dāng)時(shí)，溶液呈中性，即為化學(xué)計(jì)量點(diǎn)。

整個(gè)滴定反應(yīng)：

因此酸性溶劑是堿的均化性溶劑，對于在水中不能滴定的某些弱堿，選用酸性溶劑(如HAc)使堿性均化到溶劑陰離子(如Ac^-)的強(qiáng)度水平后，可用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液(如高氯酸)進(jìn)行滴定。

本章藥物除尼可剎米、地西泮和氯氮卓等，以游離堿的形式供分析外，多數(shù)為鹽酸鹽和硫酸鹽。這些鹽類的滴定過程，實(shí)際上是一個(gè)置換滴定，即強(qiáng)酸滴定液置換出與游離堿結(jié)合的較弱的酸。其反應(yīng)原理：

 式中表示游離堿類鹽；HA表示被置換出的弱酸。

 (二)一般方法

取樣量：以消耗標(biāo)準(zhǔn)液約8ml為度

溶劑：冰醋酸10ml～30ml

試劑：5%Hg(Ac)₂ 3ml～5ml  氫鹵酸鹽時(shí)加入

指示劑：結(jié)晶紫

復(fù)習(xí)舊課（3min)；

作業(yè)解析(5min)；

引入新課(2min)；

機(jī)理：5min

一般方法及問題討論5min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

1、適用范圍  用于K_b<10^-8的有機(jī)堿鹽及有機(jī)酸堿金屬鹽類的含量測定

  若K_b為： 10^-8～10^-10，冰醋酸為溶劑；

   10^-10～10^-12，冰醋酸與醋酐的混合溶液為溶劑；

<10^-12， 醋酐為溶劑。

  醋酐離解生成的醋酐合乙酰陽離子(CH₃CO)₃O⁺比冰醋酸中的醋酸合質(zhì)子H₂Ac⁺的酸性更強(qiáng)，因而在醋酐中有更明顯的滴定突躍。

 2、酸根的影響  本類藥物鹽中被置換出的無機(jī)酸類，在酸性介質(zhì)中的酸性以下列排序遞減：

高氯酸>氫溴酸>硫酸>鹽酸>硝酸

①若被置換出來的HA酸性較強(qiáng)，則反應(yīng)不能進(jìn)行到底，影響滴定終點(diǎn)，需進(jìn)行處理。

方法：加入定量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其生成在醋酸中難解離的鹵化汞，以消除氫鹵酸對滴定的干擾與不良影響。

2B·HX+Hg(Ac)₂→2B·Ac + HgX₂

  ↓

  和溶劑相同，不影響滴定

②Hg(Ac)₂量不足，影響滴定終點(diǎn)，使測定結(jié)果偏低；

過量的Hg(Ac)₂(1～3倍)， 不影響測定結(jié)果。

3、滴定劑的穩(wěn)定性 醋酸具揮發(fā)性，膨脹系數(shù)較大，溫度和貯藏條件影響滴定劑的濃度。

①滴定樣品時(shí)與標(biāo)定高氯酸溶液時(shí)的溫差≤10℃，校正：

   式中：0.0011為冰醋酸的體積膨脹系數(shù)，t₀為標(biāo)定時(shí)的溫度，c為滴定時(shí)的溫度，N₀為t₀時(shí)高氯酸滴定液的濃度，N₁為t₁時(shí)高氯酸滴定液的濃度。

②滴定樣品時(shí)與標(biāo)定高氯酸溶液時(shí)的溫差>10℃，重新標(biāo)定。

4、終點(diǎn)指示方法  電位法和指示劑法(多用，結(jié)晶紫指示劑)。

(四)應(yīng)用實(shí)例

1、游離弱堿性藥物的測定 

藥物：吡啶類、苯并二氮雜卓類，如：異煙肼、尼可剎米、地西泮及氯氮卓。

測定方法：直接測定。   

應(yīng)用實(shí)例30min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

例：Ch.P(2005)尼可剎米的含量測定：

^{【含量測定】  取本品約0.15g ，精密稱定，加冰醋酸10ml與結(jié)晶紫指示液1 滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml 的高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于17.82mg 的C10H14N2O 。}  

2、氫鹵酸鹽類藥物測定 

藥物：吩噻嗪類、喹啉類、托烷類藥物，如：鹽酸氯丙嗪、鹽酸環(huán)丙沙星、氫溴酸東莨菪堿。

測定方法：加入過量Hg(Ac)₂，再用高氯酸滴定液滴定。

   表  氫鹵酸鹽類藥物測定方法 

例：Ch.P(2005)鹽酸氯丙嗪的含量測定：

^{【含量測定】  取本品約0.2g，精密稱定，加醋酐10ml，振搖溶解后，加醋酸汞試液5ml 與橙黃Ⅳ指示液1 滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液顯玫瑰紅色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml 高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于35.53mg 的C17H19ClN2S.HCl 。}  

3、硫酸鹽類藥物測定 

藥物：在非水介質(zhì)中，只顯示一元酸解離為，即只供給一個(gè)H⁺，所以硫酸鹽類藥物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氫鹽，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。   

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

阿托品為堿性較強(qiáng)的一元堿藥物，其硫酸鹽簡寫：，用高氯酸直接滴定時(shí)的反應(yīng)式為：

因此，可根據(jù)1mol的硫酸阿托品消耗1mol高氯酸的關(guān)系計(jì)算其含量。

Ch.P(2005)中硫酸阿托品的含量測定：

^{【含量測定】  取本品約0.5g，精密稱定，加冰醋酸與醋酐各10ml溶解后，加結(jié)晶紫指示液1 ～2 滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯純藍(lán)色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于67.68mg 的(C17H23NO3)2.H2SO4。}  

^{(2) 硫酸奎寧測定：}

^{奎寧為二元堿，  喹核堿：堿性強(qiáng)，與硫酸成鹽}

^{喹啉堿：堿性弱，游離}  

當(dāng)用高氯酸直接測定硫酸奎寧時(shí)，1mol的硫酸奎寧消耗3mol的高氯酸：

(C₂₀H₂₄N₂·H⁺)₂SO₄+3HCIO₄→

(C₂₀H₂₄N₂·2H⁺)·2CIO₄^-+(C₂₀H₂₄N₂·2H⁺)·HSO₄^-·CIO₄^-

中國藥典和USP(24)都采用此法測定硫酸奎寧和硫酸奎尼丁的含量。 

 Ch.P(2005)中硫酸奎寧的含量測定：

^{【含量測定】  取本品約0.2g，精密稱定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml 與結(jié)晶紫指示液1～2滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于24.90mg的(C20H24N2O2)2.H2SO4。}

 ^{(3)硫酸奎寧片的含量測定：}

^{硫酸奎寧片堿化處理，生成奎寧游離堿，然后再用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定。此時(shí)，1mol的硫酸奎寧可消耗4mol的高氯酸。片劑分析的滴定度與原料藥的滴定度不同。}

^{Ch.P(2005)中硫酸奎寧片的含量測定：}

^{【含量測定】　取本品10片，除去糖衣后，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于硫酸奎寧0.3g)，置分液漏斗中，加氯化鈉0.5g與0.1mol/L氫氧化鈉溶液10ml，混勻，精密加三氯甲烷50ml，振搖10分鐘，靜置，分取三氯甲烷液，用干燥濾紙濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，加醋酐5ml 與二甲基黃指示液2 滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液顯玫瑰紅色,并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于19.57mg 的(C20H24N2O2)2.H2SO4.2H2O。}  

藥物為脂溶性，用三氯甲烷提取出藥物，再測定。否則片劑中的硬脂酸鎂可被高氯酸滴定，干擾測定。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

5、磷酸鹽與有機(jī)酸鹽  按常規(guī)方法直接滴定。

    課間休息十分鐘

  二、鈰量法

利用藥物具有還原性，在酸性介質(zhì)中可以用硫酸鈰滴定液直接滴定。

硝苯地平   鄰二氮菲指示劑指示終點(diǎn) 

吩噻嗪類   藥物自身的顏色變化指示終點(diǎn)；或采用電位法或永停法指示終點(diǎn)。

(一)硝苯地平的含量測定

終點(diǎn)時(shí)，微過量的Ce⁴⁺將指示劑中的Fe²⁺氧化成Fe³⁺，使橙紅色配合物離子呈淡藍(lán)色或無色配位化合物離子，以指示終點(diǎn)的到達(dá)。

Ch.P(2005)硝苯地平的含量測定：

^{【含量測定】  取本品約0.4g，精密稱定，加無水乙醇50ml，微熱使溶解，加高氯酸溶液（取70％高氯酸8.5ml ，加水至100ml )50ml、鄰二氮菲指示液3 滴，立即用硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，在水浴中加熱至50℃左右，繼續(xù)緩緩滴定至橙紅色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于17.32mg 的C17H18N2O6。}

(二)吩噻嗪類藥物的測定

1、基本原理  利用吩噻嗪類藥物被硫酸鈰滴定時(shí)，先失去一個(gè)電子形成一種紅色的自由離子，達(dá)到化學(xué)計(jì)量點(diǎn)，溶液中的吩噻嗪類藥物均失去兩個(gè)電子，而紅色消褪，借以指示終點(diǎn)。

15min,其中原理5min，實(shí)例10min.

鄰二氮菲指示劑：^{鄰二氮菲指示液  取硫酸亞鐵0.5g,加水100ml使溶解，加硫酸2滴與鄰二氮菲0.5g,搖勻，即得。本液應(yīng)臨用新制。}

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

硫酸鈰的優(yōu)點(diǎn)：有較高的氧化電位，且為一價(jià)還原，同時(shí)不存在對環(huán)取代基的副反應(yīng)。

如：鹽酸氯丙嗪及其片劑的測定(非藥典收載方法)。

三、比色法

(一)酸性染料比色法

方法：利用某些酸性染料，如磺酸酞類指示劑，在一定pH條件下，可與堿性藥物結(jié)合呈色，然后采用比色法測定其含量。

應(yīng)用：適于少量供試品，小劑量藥物及其制劑，或生物體內(nèi)堿性藥物的定量分析。

1、基本原理

在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中，堿性藥物(B)可與氫離子結(jié)合成陽離子(BH⁺)，而一些酸性染料，如溴百里酚藍(lán)、溴酚藍(lán)、溴甲酚紫和溴甲酚綠等，可解離成陰離子(In^-)。上述陽離子與陰離子定量地結(jié)合成有色絡(luò)合物(BH⁺In^-)離子對，可以定量地被有機(jī)溶劑提取，在一定波長處測定該溶液有色離子對的吸收度，即可計(jì)算出堿性藥物的含量。 

  2、影響因素 

(1)水相最佳pH值的選擇

最佳pH：

選擇方法：

根據(jù)有機(jī)藥物和酸性染料的pK值，以兩相分配系數(shù)而定。  

比色法35min，其中，酸性染料比色法原理10min，影響因素15min，實(shí)例10min;

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

選擇要求：

①與有機(jī)堿藥物定量結(jié)合，生成的離子對在有機(jī)相中溶解度大。

②染料在有機(jī)溶劑中不溶或很少溶解。

③生成的離子對，于其最大吸收波長處有較高的吸收度。

常用酸性染料：①溴麝香草酚藍(lán)、甲基橙、溴甲酚綠。

②托烷類含量測定，選溴甲酚綠(Ch.P)。

  濃度：不能太高，否則易產(chǎn)生乳化層，影響測定結(jié)果。

(3)有機(jī)溶劑的選擇

  選擇要求：提取率高；不與水混溶；或能與離子對形成氫鍵。

  常用：氯仿(三氯甲烷)、二氯甲烷、苯、四氯化碳等。

(4)水分的影響

在提取過程中，嚴(yán)防水分混入有機(jī)溶劑中。

  ①水相中有過量的酸性染料，影響測定結(jié)果；

②水分的混入使氯仿混濁，影響比色測定。

控制水分方法：脫水劑，或經(jīng)濾紙過濾。

酸性染料中雜質(zhì)的去除：用所選用的有機(jī)溶劑提取，除去雜質(zhì)。

3、應(yīng)用示例

氫溴酸東莨菪堿片[Ch.P(2005)](原料采用非水滴定，注射液同片劑)

^{【含量測定】  對照品溶液的制備  精密稱取氫溴酸東莨菪堿對照品30mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml ，置100ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。}    

^{供試品溶液的制備  取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于氫溴酸東莨菪堿3mg )，置50ml量瓶中，加水使氫溴酸東莨菪堿溶解并稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過，取續(xù)濾液，即得。}  

^{測定法  精密量取對照品溶液與供試品溶液各2ml ，分別置預(yù)先精密加入氯仿10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液〔取溴甲酚綠50mg與鄰苯二甲酸氫鉀1.021g，加0.2mol/L)鹽酸溶液1.6ml使溶解后，加水稀釋成100ml ，必要時(shí)濾過〕4.0ml,振搖提取后，靜置使分層；分取氯仿液，照分光光度法（附錄Ⅳ B)，在420nm 的波長處分別測定吸收度，計(jì)算，并將結(jié)果與1.141 相乘，即得供試量中含有C17H21NO4.HBr.3H2O 的重量。}

注：此法測定結(jié)果偏低，因片劑所含賦形劑有不同程度的干擾吸附。

課間休息十分鐘

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

利用吩噻嗪類藥物，在適當(dāng)pH值溶液中可與金屬鈀離子形成有色絡(luò)合物，借以進(jìn)行比色測定。

注：本法可選擇性地用于未被氧化的吩噻嗪類藥物的測定。因?yàn)殁Z離子只與未被氧化的硫共價(jià)，當(dāng)硫原子已被氧化為亞砜或砜時(shí)，則不與鈀離子呈色，因此可利用空白試驗(yàn)對照方法，消除本類藥物中的氯化物的干擾。

如：鹽酸氯丙嗪的含量測定(此法藥典未收載)

四、紫外分光光度法

(一)直接分光光度法

供試品不需分離，溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲屑纯蛇M(jìn)行含量測定。

1、奧沙西泮的測定

對照品法

2、鹽酸異丙嗪片的測定

百分吸收系數(shù)法

3、鹽酸異丙嗪注射液的測定

百分吸收系數(shù)法

(二)萃取后分光光度法

優(yōu)點(diǎn)：消除注射液中添加的亞硫酸鈉和維生素C抗氧劑的干擾。

不足：被測組分兩次提取易損失，致使測定精密度不高，準(zhǔn)確度較差。

如：鹽酸氯丙嗪的測定

鈀離子比色法自學(xué)。

2min

3min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

   兩次萃取，分離其他組分，消除干擾。

2測定方法  精密量取本品適量(約相當(dāng)于鹽酸氯丙嗪100mg)，以鹽酸液(0.1mol/L)稀釋至500ml。分取上述溶液5ml，置分液漏斗中，加水20ml，加氨水呈堿性，用乙醚振搖提取4次，每次25ml。合并乙醚液，用水洗滌2次，每次10ml，合并洗液，用乙醚20ml提取，棄去洗液。合并前后兩次得到的乙醚液，分四次用鹽酸液(0.1mol/L)萃取，每次25ml。合并酸液，并稀釋成0.0005%濃度的溶液。以鹽酸液(0.1mol/L)作空白，用分光光度計(jì)在254±1nm波長處進(jìn)行測定，以鹽酸氯丙嗪為915，計(jì)算供試品中鹽酸氯丙嗪的量，即得。

(三)萃取-雙波長分光光度法

USP(24)用于鹽酸氯丙嗪注射液的含量測定，主要用來校正樣品中氧化物對測定的干擾。

優(yōu)點(diǎn)：消除注射液中添加的亞硫酸鈉和維生素C抗氧劑的干擾。

不足：被測組分兩次提取易損失，使測定精密度不高，準(zhǔn)確度較差。

1、測定原理

由兩波長處測得的吸收度之差計(jì)算氯丙嗪的含量。

2、測定方法

   精密量取鹽酸氯丙嗪注射液適量，鹽酸液(0.1mol/L)稀釋至500ml，精密量取10ml，濃氨溶液堿化游離，乙醚提取，鹽酸提取，合并酸提取液于250ml量瓶中，作為供試液。另取定量對照品，用鹽酸液(0.1mol/L)溶解并稀釋制成8μg/ml的對照品溶液，分別于254nm及277nm波長處測定吸收度。

  鹽酸氯丙嗪含量(mg/ml)=12.5C(A₂₅₄－A₂₇₇)_U / V(A₂₅₄－A₂₇₇)_S

12.5為稀釋體積及濃度單位換算因數(shù)，C為對照品溶液濃度，V為取樣量(ml)，U表示供試品溶液，S表示對照品溶液。()

說明：因?qū)φ掌窛舛葹棣蘥，所以再除以1000，得mg/ml。

15min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

優(yōu)點(diǎn)：消除抗氧劑的干擾，提高了測定的精密度和準(zhǔn)確度。

導(dǎo)數(shù)光譜是將常規(guī)的測量吸光度變?yōu)闇y量吸光度對波長的變化率，也就是測量信號強(qiáng)度分布的斜率(數(shù)學(xué)上稱為導(dǎo)數(shù))，其實(shí)質(zhì)可視為一種數(shù)學(xué)變換。通過這種變換，光強(qiáng)度信號對波長的函數(shù)(吸收光譜)變成了光強(qiáng)度信號的變化率對波長的函數(shù)(導(dǎo)數(shù)光譜)。導(dǎo)數(shù)光譜是經(jīng)過數(shù)學(xué)變換處理后排除共存物質(zhì)吸收干擾，實(shí)現(xiàn)選擇測定的一種分光光度法。

導(dǎo)數(shù)光譜曲線是在零階吸收光譜曲線(即常規(guī)的吸收曲線)的基礎(chǔ)上求得的。將零階吸收光譜的各波長點(diǎn)的吸光度對波長求導(dǎo)后，將各導(dǎo)數(shù)值連接而成的新的曲線即導(dǎo)數(shù)光譜曲線。即以吸光度對波長的導(dǎo)數(shù)值。

1、光譜繪制  繪制待測組分和干擾組分的零階、一階和二階導(dǎo)數(shù)光譜。

2、線性關(guān)系  以振幅為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制。

3、供試品測定

五、氣醫(yī)學(xué).全在線m.zxtf.net.cn相色譜法

注：氣相色譜主要用于分析氣體、揮發(fā)性和半揮發(fā)性液體，以及能夠產(chǎn)生足夠蒸氣壓的固體或者沸點(diǎn)在500℃以下、相對分子質(zhì)量400以下的物質(zhì)。

(一)硫酸阿托品片的含量測定

USP(24)采有此法。

1、測定原理及方法

  以后馬托品為內(nèi)標(biāo)物(外插參照峰)，采用對照品法進(jìn)行測量。

(二)、人血漿中硝苯地平的氣相色譜法測定及藥代動力學(xué)研究

課后查閱與此相關(guān)資料，自學(xué)。

六、高效液相色譜法

  地西泮注射液(Ch.P)

  (一)、反相高效液相色譜法

適合于共存組分極性差異較大樣品的分析。

RP的概念：指流動相極性大于固定相極性的色譜方法。

固定相：ODS，即十八烷基硅烷鍵合硅膠。

5min

5min

10min,結(jié)合多媒體課件，通過多媒體模型，重點(diǎn)講解離子對色譜法的原理、分離機(jī)制

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

流動相：pH值為2～8。過高，可使化學(xué)鍵合的固定相水解。

 用于堿性雜環(huán)類藥物分析時(shí)，流動相中常加入二乙胺、三乙胺等堿性試劑。原因：硅醇基部分硅烷化，裸露的硅醇基與堿性藥物發(fā)生吸附或離子交換，而使堿性藥物色譜峰產(chǎn)生拖尾，分離效能下降，保留時(shí)間，甚至不能被洗脫。因此加入堿性試劑，抑制堿性藥物電離，使其以非電離的形式存在，增加脂溶性，改善分離效能。

例1：地西泮注射液的反相HPLC法 Ch.P(2005)

^{【含量測定】  照高效液相色譜法（附錄Ⅴ D)測定。}  

^{色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)  用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇－水(70:30)為流動相；檢測波長為254nm 。理論板數(shù)按地西泮峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，地西泮峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。}

^{內(nèi)標(biāo)溶液的制備  取萘50mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。}  

^{測定法  取地西泮對照品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各5ml ，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，吸取5～10μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取本品適量（約相當(dāng)于地西泮5mg)，同法測定。按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。} 

 例2：HPLC法測定硫酸阿托品片的含量

 例3：HPLC法測定血漿中地西泮濃度

(二)離子對高效液相色譜法(paired ion chromatogramphy，PIC或ion pair chromatogramphy，IPC)

常用反相離子對色譜法(RPIC)

反相離子對色譜法是把離子對試劑加入極性流動相中，被分析的樣品離子在流動相中與離子對試劑的反離子生成不荷電的中性離子對，從而增加了樣品離子在非極性固定相中的溶解度，使分配系數(shù)增加，改善分離效果。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

分析堿類：用烷基磺酸鹽為離子對試劑。如：戊烷磺酸鈉(C₅H₁₁SO₃Na)及庚烷磺酸鈉(C₇H₁₅SO₃Na)等。

分析酸類：用四丁基季銨鹽(PIC-A)。如：四丁基胺磷酸鹽(TBA)。

2、分離機(jī)制

以離子對模式說明分離機(jī)制

上圖中B為堿分子，遇H⁺生成BH⁺正離子，在流動相中與離子對試劑的反離子生成不荷電的中性離子對而溶入非極性固定相中。

3、應(yīng)用

1)RPIC法定人血清中異煙肼濃度  HPLC法前處理復(fù)雜、繁瑣、費(fèi)時(shí)。改用離子對色譜法。

離子對試劑：庚烷磺酸鈉

內(nèi)標(biāo)物：煙酰胺

(1)色譜條件：pH2.5有利于生物堿離解。

(2)血清樣品的預(yù)處理：沉淀蛋白。

(3)線性關(guān)系：配制含不同量異煙肼的人血清，計(jì)算異煙肼與內(nèi)標(biāo)物色譜峰之比，以比值與異煙肼濃度進(jìn)行線性回歸。求回歸方程。

(4)回收率試驗(yàn)  加樣回收法

(5)精密度試驗(yàn)

(6)干擾試驗(yàn)  內(nèi)源性物質(zhì)、其他抗結(jié)核藥物有無干擾。

(7)血藥濃度監(jiān)測

(8)結(jié)果與討論  簡化了前處理過程。

2)HPLC法測定鹽酸環(huán)丙沙星血藥濃度及其藥動力學(xué)研究 

問題討論(5min)

作業(yè)和習(xí)題布置(2min)

歸納總結(jié)(3min)

小 結(jié)

通過學(xué)習(xí)使學(xué)生掌握非水溶液滴定法、鈰量法、比色法、紫外分光光度法、氣相色譜法和高效液相色譜法測定本類藥物的原理和應(yīng)用。特別是非水溶液滴定法的基本原理，方法，問題討論及應(yīng)用；酸性染料比色法的原理，影響因素及應(yīng)用示例。

復(fù)習(xí)思考題

或

作 業(yè) 題

1、非水溶液滴定適用的范圍？

2、在非水溶液滴定法中何時(shí)需加醋酸汞？為什么？

3、酸性染料比色法的影響因素？

教 學(xué) 效 果

與 分 析

多媒體教學(xué)和板書相結(jié)合，并結(jié)合一定的實(shí)例，加深學(xué)生對知識點(diǎn)的認(rèn)識和了解。特別是通過問題討論，讓大家對所學(xué)知識進(jìn)行回故、討論，建立一個(gè)互動的教學(xué)氛圍。效果較好。